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通往SCI的shortcut之三:基础实验|AME丛书之《内分泌那些事儿》

Published at: 2015年第1卷第S1期

胡文超
关键词:

编者按:您正又恨又爱地追求 SCI 文章吗?您正在苦于既当医生又做科学家吗?其实,科研可以指导临床,临床反过来又可以激发新的科研。科研、临床并不分家,谁也离不开谁。秉承着“快乐搞学术”的理念,《内分泌那些事儿》应运而生。一起看看他们的故事,让我们碰撞出更多的科研火花吧!

上期我们介绍了通往 SCI 的 shortcut 不仅在于如何正确看文献,还在于如何找到 idea,今天,让我们一起来看看捷径之三是什么吧!

 

有了 idea 以后,就要付诸实践了,这大概分成基础实验和临床研究两方面。咱们先来聊一下基础实验,基础实验主要是跟细胞或者动物相关的实验。这里有一些问题需要注意:

1)不要把实验设计得过广,广的话往往意味着肤浅,除非你的人力跟物力都很充足,这就另当别论了。其实要发表 SCI,只要在一点上面做得稍微有一点深度就行了。这方面不少中国研究生喜欢用一个实验来证明 N 个结论,老外喜欢用 N 个实验来证明一个结论。尝试着用一个或几个简单的实验来证明一个结论,这就足够了。

2)半定量的 PCR 还是抛弃了吧,现在的实时定量 PCR 也不是很贵,还是选择 real-time 吧。

3)如果牵扯到基因的表达,需要从 mRNA 和蛋白两个水平来解释,也就是说需要用 real-time PCR 和 western、免疫组化等实验方法来同时检测某基因的表达水平。单纯只做 mRNA 水平,还是“ too young”,多半会被审稿人追问的,因为单纯的 mRNA 水平的变化并不能说明最后蛋白水平也是相同的变化。如果确实缺少经费,可以只选择做蛋白水平,舍弃 mRNA 水平。

4)动物实验最好多留一些标本。比如研究糖尿病肾病,用大鼠造模,最好把其它的脏器肝脏、心脏什么的也留好吧,毕竟造模不容易,3 个多月的时间,花钱也挺多的。这个按说是违背国外的实验动物原则的,按老外的意思,实验动物不能受太多痛苦,不能一次性取材过多。

另外,再说一下我的泣血经验。

1)关于实时定量的引物

real-time PCR 的引物最好找比较有经验的人帮忙设计,引物的好坏直接决定 PCR 产物特异性的高低,你的实验顺利不顺利,好的引物会让你节省好多的时间,当然也会节省资金。

2)关于抗体

一抗强烈推荐如 abcam、罗氏等公司的产品,虽然其价格是好抗体的一半左右,但是很有可能让你浪费大量的时间、精力和金钱,到头来不仅得重新花钱买抗体,还搭进去好几个月的时间和精力。因为你用二流公司或是国产的一抗,不出结果的时候,你不知道是抗体的问题还是其他步骤的问题,来回找原因,到最后可能还是需要换抗体。如果用好的一抗,不容易出问题,实验一般会比较顺利。至于二抗,技术比较简单,用国产的没问题。

3)关于合成引物

这对于涉及到克隆表达的实验尤为重要。现在的引物合成利润比较低,公司一般都不太重视,没什么责任心,经常合成错了。有时候花好几个月的时间连载体,好不容易连好,送测序,最后发现几个错配碱基,找原因知道是引物合成错了,几个月的时间就白费了。公司的赔偿措施仅仅就是简单的免费重新合成,你也就能骂一句泄愤了。这个问题不好解决,每个公司都可能出问题,碰上算是自己倒霉吧,只能是祝好运!

4)ELISA 试剂盒

ELISA 试剂盒尽量买进口的,而且是大公司的,结果精确。不过好多代理公司都会忽悠是原装进口的,你可以自己查一下是不是有名的公司,经常是代理公司买的国产试剂盒包装成“野鸡”进口公司的,一定要小心。那么,这种奸商是怎么制作国产 ELISA 试剂盒的呢?他们是这样操作的,他们拿每个组织都能检测到的常用蛋白,比如 TGF,做成其他各种蛋白的 ELISA 试剂盒,这样的结果可信度可想而知了。大家买 ELISA 之前搜一下看是不是奸商公司,大家不要受骗。

5)关于进口分装

如果代理商告诉你是进口分装的,你基本可以肯定他是奸商了,目前 99% 的进口分装试剂都是国产的。我以前买造糖尿病模型的链脲佐菌素曾经上过当,记得当时他们告诉我是 sigma 进口分装的,后来知道是广州一个国产公司的,成本 200 元,卖 2100 元,白粉一般的暴利啊!尾静脉注射 1 周后大部分老鼠都很精神,测血糖正常极了,害得我只好二次造模。

 

文|胡文超,山东大学齐鲁医院。

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本书简介

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doi:

10.3978/kysj.2014.1.1243
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